NEB內切酶并不兼有甲基化酶的活性。細胞內可另有獨立的甲基化酶，它切斷DNA時不需ATP,也不需SAM。它的切點是嚴格的，而且就在識別順序之中。Ⅱ型的酶在蛋白質組成上比Ⅰ型、Ⅲ型要簡單的多，它只有單一的亞基，以二體或四體發揮作用。有的酶要5或 7個甚至更長的識別順序。識別順序短的在DNA分子上出現的幾率多，酶可把DNA分子切成較多的小片段識別順序長的則往往只切出少數大片段。這些酶切片段統稱為限制性片段。用傳感器感知外界環境、分析外界條件，然后通過適當的方式來理解環境，對于工作在復雜或非常規化環境中的自主式AGV，要進一步提高其自主判斷能力，依靠自身模式識別及障礙物識別，實現正常工作。

    在PCR產物兩端設計一定的限制酶切位點，經NEB內切酶切后克隆至用相同酶切的載體中。但實驗證明，大多數限制酶對裸露的酶切位點不能切斷。必須在酶切位點旁邊加上一個至幾個保護堿基，才能使所定的限制酶對其識別位點進行有效切斷。酶切位點（內切酶的識別序列）要加在引物端，為保證PCR產物能被限制性內切酶的識別且有效的酶切，一般在引物的端酶切位點側邊加上保護堿基。